一、凝集反应
原理：抗原与抗体结合形成肉眼可见的凝集颗粒。
1. 直接凝集反应
特点：天然颗粒性抗原（如细菌、红细胞）直接与抗体结合。
1.1 玻片法
- 原理：抗原与抗体在玻片上混合，直接观察凝集现象。
- 应用：血型鉴定（ABO血型）、细菌快速分型（如沙门氏菌）。
- 记忆点：定性试验，快速但灵敏度低。
1.2 试管法
- 原理：抗原与抗体在试管中孵育，观察凝集效价（最高稀释度仍出现凝集的浓度）。
- 应用：肥达试验（伤寒诊断）、外斐试验（立克次体病）。
- 记忆点：定量试验，需37℃孵育过夜。
口诀：
玻片定性快又简，试管定量效价算；血型伤寒立克次，直接凝集天然抗。
2. 间接凝集反应
特点：可溶性抗原吸附于载体颗粒（如胶乳、红细胞），再与抗体结合。
2.1 正向间接凝集试验
- 原理：载体颗粒包被抗原→检测样本中的抗体。
- 应用：类风湿因子（RF）检测（胶乳颗粒凝集）。
2.2 反向间接凝集试验
- 原理：载体颗粒包被抗体→检测样本中的抗原。
- 应用：乙肝表面抗原（HBsAg）检测。
2.3 间接凝集抑制试验
- 原理：待测抗原与载体抗原竞争结合抗体，凝集被抑制为阳性。
- 应用：妊娠试验（尿液中HCG检测）。
2.4 协同凝集试验
- 原理：利用金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）的Fc段结合抗体，检测抗原。
- 应用：脑膜炎球菌抗原快速检测。
口诀：
间接凝集借载体，正向测抗反向抗；抑制试验竞争抗，协同凝集SPA强。
二、沉淀反应
原理：可溶性抗原与抗体结合形成沉淀线/环。
1. 液体内沉淀试验
1.1 免疫透射比浊法
- 原理：抗原抗体复合物减少透射光强度，通过比色定量。
- 应用：血清IgG、补体C3检测。
1.2 免疫散射比浊法
- 原理：复合物散射光强度与抗原浓度正相关。
- 应用：C反应蛋白（CRP）、尿微量白蛋白检测。
1.3 免疫胶乳比浊法
- 原理：胶乳颗粒增强复合物浊度，提高灵敏度。
- 应用：类风湿因子（RF）定量检测。
口诀：
液内沉淀比浊法，透射散射胶乳夸；CRP和尿蛋白，灵敏快速自动化。
2. 凝胶内沉淀试验
2.1 单向扩散试验
- 原理：抗原在含抗体的琼脂中扩散形成沉淀环（环直径与抗原浓度正相关）。
- 应用：IgG、IgM定量检测。
2.2 双向扩散试验
- 原理：抗原与抗体在琼脂中自由扩散形成沉淀线（判断抗原同源性）。
- 应用：乙肝抗原分型（HBsAg亚型分析）。
口诀：
单向扩散测浓度，双向扩散看同源；琼脂凝胶沉淀显，抗原抗体自由迁。
3. 免疫电泳技术
3.1 对流免疫电泳
- 原理：抗原与抗体在电场中相向移动，加速沉淀形成。
- 应用：乙肝表面抗原（HBsAg）快速检测。
3.2 火箭免疫电泳
- 原理：抗原在电场中向抗体迁移，形成火箭状沉淀峰（峰高与抗原量正相关）。
- 应用：血清蛋白定量（如AFP）。
3.3 免疫电泳
- 原理：电泳分离抗原后与抗体扩散形成沉淀弧。
- 应用：多发性骨髓瘤M蛋白初步筛查。
3.4 免疫固定电泳
- 原理：电泳分离后固定抗原，加抗体显色。
- 应用：单克隆免疫球蛋白病确诊（如IgGκ型骨髓瘤）。
3.5 SDS-PAGE
- 原理：十二烷基硫酸钠变性蛋白质，按分子量分离。
- 免疫应用：Western blot前处理（如HIV抗体确认试验）。
3.6 等电聚焦电泳（IEF）
- 原理：按蛋白质等电点（pI）分离。
- 免疫应用：单克隆抗体电荷异质性分析。
口诀：
免疫电泳花样多，对流火箭速度快；免疫固定显M蛋，SDS分Western来。
三、放射免疫技术
原理：放射性同位素标记抗原/抗体，检测微量物质。
1. 放射免疫分析（RIA）
- 标记物：放射性抗原（如¹²⁵I标记胰岛素）。
- 检测对象：抗原（竞争法）。
- 应用：激素检测（T3、T4）。
2. 免疫放射分析（IRMA）
- 标记物：放射性抗体（如¹²⁵I标记抗AFP抗体）。
- 检测对象：抗原（非竞争法，双抗体夹心）。
- 应用：肿瘤标志物（AFP、CEA）。
口诀：
放射免疫分两型，RIA抗原标记清；IRMA标记抗体量，双抗夹心灵敏度精。
四、酶免疫技术
原理：酶标记抗体/抗原，催化底物显色。
1. 酶免疫组织化学技术
- 原理：酶标记抗体定位组织中的抗原（如HRP-DAB显色）。
- 应用：乳腺癌HER2蛋白检测。
2. 酶免疫分析（EIA）
2.1 均相酶免疫分析
特点：无需分离游离与结合标记物。
2.1.1 EMIT（酶放大免疫分析）
- 原理：抗原与酶标抗原竞争结合抗体，酶活性变化直接检测。
- 应用：药物浓度检测（如地高辛）。
2.1.2 CEDIA（克隆酶供体免疫分析）
- 原理：抗原竞争结合抗体，影响酶片段重组活性。
- 应用：甲状腺激素检测。
2.2 异相酶免疫分析（ELISA）
特点：需分离游离与结合标记物（固相载体）。
2.2.1 检测抗原
双抗体夹心法
- 原理：包被抗体→捕获抗原→酶标二抗显色。
- 应用：HBsAg、AFP、HCG检测。
双位点一步法
- 原理：同时加入样本和酶标抗体，缩短时间（易出现钩状效应）。
竞争法
- 原理：待测抗原与酶标抗原竞争结合抗体。
- 应用：小分子抗原（如T3、T4）。
2.2.2 检测抗体
- 间接法
- 原理：包被抗原→捕获抗体→酶标二抗显色。
- 应用：HIV（艾滋）、HCV（丙肝）、TP（梅毒）抗体筛查。
- 竞争法
- 应用：抗HBc抗体检测
- 双抗原夹心法
- 应用：HbsAb（表面抗体）检测
- 捕获法
- 原理：包被抗IgM抗体→捕获IgM→抗原→酶标抗体显色。
- 应用：TORCH IgM，HBc IgM（核心抗体）检测。
口诀：
均相无需洗板烦，EMIT和CEDIA；异相ELISA四法，夹心竞争间接抓。
钩状效应一步法，捕获测IgM不差。
五、综合记忆表
| 技术 | 核心标记物 | 典型应用 | 记忆关键词 |
|---|---|---|---|
| 直接凝集（玻片） | 无 | ABO血型鉴定 | 快速定性 |
| 间接凝集（胶乳） | 胶乳颗粒 | 类风湿因子检测 | 可溶性抗原载体化 |
| 免疫透射比浊 | 无 | 血清IgG定量 | 光强度变化 |
| 火箭电泳 | 无 | AFP定量检测 | 峰高定浓度 |
| RIA | ¹²⁵I标记抗原 | 激素检测（T3、T4） | 竞争法，高灵敏度 |
| ELISA双抗夹心 | HRP标记抗体 | HBsAg检测 | 大分子抗原检测 |
| 免疫组化（IHC） | HRP/DAB | HER2蛋白定位 | 组织切片，棕色显色 |
六、终极口诀
凝集沉淀分直间，放射酶标发光显；
电泳比浊凝胶扩，组化定位最直观。
ELISA法四类型，均相异相要分全；
技术原理应用清，考试重点全过关！
按此结构记忆，可系统掌握各类技术的核心差异与应用场景！